Experimental Methods

骨骼濃縮超濾法 Bone Pretreat Method

  • 以超濾法提取骨骼樣品中的骨膠原(collagen)與明膠(gelatin)
骨質材料成分複雜,在埋藏過程中容易受到細菌和酶的腐化與分解,也容易與地下水作用,不斷吸附和交換周圍的各種有機物和無機物。骨骼中的骨膠原,因抗腐能力強,可以保存持久,容易去除汙染物,因此,用骨膠原測定所得到的碳十四年代數據是較為可靠。
 

(1)骨骼以超音波清洗、烘乾,挑選質地較密的部分研磨和粉碎,研磨後的骨骼大小最好是0.5mm到2mm。每個樣品至少需要5g。

(2)室温下,0.5N HCl,進行去除鈣質(磷酸鈣和碳酸鈣)反應,進行24-36小時。若沒有反應完全,脫鈣反應時間要延長。

(3)用MQ水洗滌脱鈣的骨骼樣品,測試其pH值。在室温下用0.1N NaOH去除樣品中的腐植酸,進行1小時。然後用0.1N HCl洗滌,再用MQ水洗滌。前處理步驟進行到此,可得到粗骨膠原提取物。

(4)然後將所得到的粗骨膠原樣品浸在5cc的0.01N HCl中,維持60℃,放置到隔天,水解成明膠。

(5)將樣品移入濃縮超濾離心管離心。此過程可以去除骨膠原中的小汙染物質。

(6)吸取液態樣品移入厚壁culture tube內,用液態氮冷凍,將純化的明膠提取物在真空離心機中冷凍乾燥。

(7)紀錄最終的產量。